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PCR實驗室建設四要素

來源: 時間:2022-06-11 08:50:26 瀏覽次數:

1、試劑準備區。


        用于準備試劑。該區域為正壓,以防止污染物溢出。該區域可分為三個區域:普通提取試劑的準備區。PCR試劑準備區和PCR主反應液準備區。在普通提取試劑的準備區準備一些核酸提取所需的裂解液和提取液;PCR試劑準備區用于制備和保存PCR試劑。例如,準備PCR試劑,如引物和探頭。為了防止交叉污染,避免重復冷凍和解凍,試劑儲存溶液應平均體積小,儲存在該房間后使用:主反應混合物(樣品除外)將用于PCR主反應液準備區。將所有PCR所需試劑的混合物添加到PCR管中的操作。重要提示:其他房間的材料(包括膨脹、模板和目標核酸或陽性對照)不得帶入試劑準備區。


        2、樣品準備區。


        該區域沒有壓力設置要求。該區域用于分割樣品、研磨、破碎和均勻漿液的區域。因為在這些破碎、研磨和均勻漿液處理過程中會產生氣溶膠,因此存在陽性樣品污染后續操作的可能性。該區域應與后面的區域嚴格隔離,并應放置在與后面三個區域分離的獨立房間中。樣品準備區還可以設置專門的封閉區域或房間,用于接收和存放樣品。這個房間可以放在冰箱里存放樣品,應該和樣品準備區的其他區域隔離。樣品準備區域的人員不得進入試劑準備區域。


        3、核酸提取區。


        核酸提取區是從樣品中提取核酸的區域。該區域為負壓,以防止核酸溢出造成的污染。樣品準備區還包括從樣品中提取和純化核酸的區域,以及將核酸添加到含有PCR主反應混合管的操作區域。添加樣品后,應盡快覆蓋PCR管的蓋子。當使用PCR板和橡膠蓋時,陽性控制和包含目標序列的樣品應與要測量的樣品分開操作,以避免添加模板時的交叉污染。

重要提示:本房間內的所有物品不得帶人試劑準備區。


        4、擴大和產品檢測區域。


        該區域用于PCR擴增和PCR分析。PER儀器被放置在這個區域。為了防止核酸溢出,房間保持負壓。這個地區的人bi須一直穿工作服。

        離開房間前脫下手套,防止擴增子污染其他地方。所有用于擴增和產品檢測的設備都應指定用于該房間。PCR分析]di二項工作也設置在該區域,如酶切、測序、克隆等,但實驗室應盡可能將這些活動與不同的區域或房間分開。降低擴增產品的污染風險。如果沒有條件在該區域設置負壓,則bi須在該區域設置排氣裝置。

        重要提示:此房間的物品不能帶人樣品準備區或試劑準備區。

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